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Determinación de anticuerpos leptospirales en bovinos y en personal vinculado a la ganadería

Determinación de anticuerpos leptospirales en bovinos y en personal vinculado a la ganadería

Los objetivos del presente trabajo fueron realizar el diagnóstico de leptospirosis e identi car las serovariedades prevalentes de Leptospira interrogans en ganado bovino y en personal vinculado a la ganadería en el cantón Loja.

Se analizaron 600 muestras sanguíneas de hembras bovinas en edad reproductiva procedentes de 136 fincas del sector rural y urbano del cantón Loja y 89 muestras sanguíneas de personal vinculado a la ganadería, mediante la Técnica de Aglutinación Microscópica con antígenos vivos (MAT) que utilizó 25 serovariedades, y evaluación de aglutinación por Microscopia de Campo Oscuro. Se obtuvieron 449 casos positivos en bovinos y 15 casos positivos en humanos, en animales se detectaron una seroprevalencia del 75% y el 16,85% de casos positivos en el personal vinculado al sector agropecuario. Para bovinos se realizó diagnóstico pareado con el 4,45% de nuevas muestras de los reactores positivos. En el caso de humanos se realizó el diagnóstico pareado en todos los casos de reactores positivos. Las especies de Leptospira interrogans identi cadas en los animales fueron: L. bataviae swart, L. gripotyhosa, L sejroe, L. icterohemorragiae, L. pomona, L. canicola, L. autummalis, L. hardjo, L. hebdomadis, L. wol , L. tarasovi, L. castellonis, L. saxkoebing, L.australis, L. pyrogenes, L. panamá, L. djasiman, L. javanica, L. Shermani y de Leptospira bi exa fue identi cada L. patoc. En Humanos se identi có las especies de Leptospira interrogans: L. bataviae swart, L. gripotyhosa, 

L sejroe, y L. icterohemorragiae, L. castellonis, L. javanica, y de Leptospira biflexa; L. patoc. Por la presencia de anticuerpos de especies de Leptospira interrogans en animales y humanos se hace necesario y urgente estudios de mayor profundidad para combatir el problema. 

La leptospirosis fue primariamente descrita por A. Weil en 1886 (Pedraza et al.), y en 1907 Stimson visualizó el microorganismo en un corte de tejido renal de un paciente fallecido durante una epidemia de ebre amarilla. En 1915 el agente fue cultivado y aislado por los japoneses Inada e Ido (García et al.). 

La Organización Panamericana de la Salud (OPS) considera a la leptospirosis como una de las zoonosis desatendidas de las poblaciones relegadas (OPS), y está considerada como un problema emergente de salud pública (Bharti et al.), tiene una distribución mundial, es endémica en muchos países tropicales y subtropicales y en los últimos 20 años se convierte en un verdadero problema de salud (Suputtamongkol et al.). 

La transmisión de la infección entre hospedadores de nitivos, frecuentemente, es directa mediante contacto con orina, uidos de placenta o leche infectados, además la infección puede ser transmitida por vía venérea o transplacentaria, siendo el periodo de incubación de 2 a 10 días (Zunino). Luego de que ocurre la infección aguda o subclínica, las leptospiras se localizan en los riñones en donde pueden persistir y multiplicarse, eliminándose posteriormente por la orina durante semanas o meses después de la infección inicial (Texas Agricultural Extension Service). 

El diagnóstico se lo realiza a través de la prueba de Aglutinación Microscópica (MAT) que es la prueba serológica estándar de referencia para la detección de anticuerpos leptospirales de animales y humanos. Es muy útil en la demostración de un cambio en los títulos de anticuerpos en sueros pareados en etapa aguda y convaleciente en humanos en los que se ha observado que hasta un 20% del total de los casos noti cados evolucionan a estadios clínicos graves (WHO). En animales por la di cultad de conseguir los sueros pareados los resultados se deben correlacionar con los signos clínicos del animal afectado (Balamurugan et al). Los animales infectados pueden abortar o ser portadores renales y genitales mostrando títulos de MAT por debajo del título mínimo signi cativo ampliamente aceptado de 1/100 (OIE). 

Los serovares se han clasificado tradicionalmente como pertenecientes a las especies: Leptospira interrogans y Leptospira bi exa, sin embargo estudios sustentados en ADN, muestran cambios taxonómicos con respecto a esta clasificación, de modo que el género Leptospira comprende tres especies no patógenas: L.biflexa, L. meyerii, L. wolbachii, y las siguientes siete especies patógenas: L. borgpetersenii, L. inadai, L.interrogans, L. kirschneri, L. noguchii, L. santarosai y L. weilii, distribuidas en 24 serogrupos y 237 serovares (Farr), Plank y Dean incluyen L. alexanderi y L. fainei. Levett incorpora L. parva como no patógena y otras cuatro geno-especies (Levett). 

De World Animal Health señala que se desconoce la magnitud de la enfermedad en el Ecuador (WAH Sanidad animal), no obstante se han realizado trabajos aislados como tesis de grado para conocer la prevalencia, reportándose en hatos bovinos estabulados de Manabí una prevalencia del 87,92% (Meza); para Quevedo el 49,75% de leptospirosis bovina (Macías) y en la periferia de las parroquias urbanas de Loja la prevalencia de esta enfermedad fue reportada en un 48,1% (Albarracín). El Ministerio de Salud Pública reporta 1.761casos de leptospirosis humana en el Ecuador entre 1990 y el año 2010, observándose que en la provincia de Loja, en este mismo periodo, no se reporta la presencia de la enfermedad (Aguilar J). 

La leptospirosis es una zoonosis potencialmente mortal, en particular en áreas tropicales y subtropicales y en países en vías de desarrollo (Céspedes), por lo que además de la importancia económica que conlleva, tiene gran impacto en la salud pública, lo que condujo a desarrollar la presente investigación de identi cación serológica de anticuerpos leptospirales en bovinos, así como en el personal vinculado a las tareas de su manejo y a la determinación, mediante antígenos de los serovares existentes. 

Materiales y Métodos 

El presente estudio se llevó a cabo en las Unidades Productivas Agropecuarias bovinas de las parroquias urbanas y rurales del cantón Loja, ubicadas entre os 1540 y 2705 m.s.n.m., al sur del Ecuador, con un clima templado subandino y tropical subandino que tiene temperaturas que uctúan entre los 12°C y 21° C, precipitación de 900 mm/año, y humedad relativa del 77% (INAMHI). 

Se tomaron muestras de sangre a 600 hembras bovinas de 137 ganaderías de las parroquias urbanas y rurales del cantón Loja, mediante punción de la arteria coccígea media, la recolección de la sangre se realizó en vacutainers sin anticoagulante previamente identi cados en cantidad de 8 a 10 ml, y su transporte en coolers a menos cuatro grados centígrados, una vez en el laboratorio las muestras se sometieron a centrifugación a 3000 rpm durante cinco minutos y se obtuvo el suero sanguíneo, los animales en estudio tienen un promedio de edad de 4,9 años. Se estudiaron 89 personas involucradas en la ganadería, 60 hombres y 29 mujeres, con un promedio de edad de 25,6 años de 10 ncas determinadas como positivas a leptospirosis. El análisis de laboratorio se hizo mediante la prueba de MAT en búsqueda de anticuerpos leptospirales contra veinte y cinco serovariedades de Leptospira spp., según la clasi cación tradicional en Leptospira interrogans y Leptospira bi exa, considerándose positivas las muestras que alcancen títulos iguales o superiores a 1 en 100. En el caso de muestras de suero humano se realizó primero la prueba de Inmunoabsorción Ligado a Enzimas (ELISA) y los sospechosos o positivos se los sometió a MAT., los sueros sanguíneos se analizaron en los laboratorios de salud y de microbiología animal del Instituto Nacional de Investigación en Salud Pública (INSPI Quito y Guayaquil). 

Las biovariedades utilizadas para la prueba son las utilizadas por los laboratorios de microbiología del INSPI Quito y Guayaquil. Las 20 biovariedades patógenas que se utilizaron en la prueba fueron. L. icterohemorragiae, L. canicola, L. bataviae swart, L. pomona, L. sejroe, L. autummalis, L. hardjo, L. wol , L. grippothyphosa, L. hebdomadis, L.L. tarasovi, L. castellonis,L. saxkoebing, L.australis, L. pyrogenes, L. panamá, L. djasiman,L. javanica, L. canicola, L. shermani,L. cophenhageni, L. borincana, L. 0 Bratislava, L. celledoni, y como control fue utilizada la biovariedad no patógena L. patoc. Los resultados obtenidos fueron procesados con el auxilio de una tabla para calcular y analizar los datos, desarrollado en Excel. 

Resultados 

La Prueba de Micro-aglutinación (MAT) para diagnóstico de leptospirosis bovina permitió determinar la presencia de la bacteria en el 89% de ncas muestreadas (121). Figura 1 

La distribución de ncas positivas por parroquias (Figura 2) nos muestra a las ganaderías de las parroquias de El Valle (19%), San Lucas (12%) y San Sebastián (11%) como las de mayor presencia de anticuerpos leptospirales. 

Seropositividad en animales 

El test de microaglutinación MAT de las 600 muestras de suero sanguíneo bovino mostró diagnóstico positivo a la presencia de anticuerpos leptospirales en el 75% de los casos (449 muestras positivas), Figura 3 en el cantón Loja. 

Los reactores positivos a MAT se encuentran en mayor porcentaje en el Valle 24,5% (110 muestras), San Sebastián 24,1% (108 muestras), San Lucas 10% (45 muestras), Taquil 7% (33 muestras), Santiago 6,2% (28 muestras) y Yangana 6% (27 muestras), Figura 4. 

Serovariedades de Leptospira encontradas en el Cantón Loja 

Se llegó a determinar mediante la prueba MAT la presencia de anticuerpos de diecinueve serovariedades (Figura 5) de Leptostipra interrogans en el cantón Loja L. icterohemorragiae, L. canicola, L. bataviae swart, L. pomona, L. sejroe, L. autummalis, L. hardjo, L. wol , L. grippothyphosa, L. hebdomadis, L. tarasovi, L. castellonis, L. saxkoebing, L.australis, L. pyrogenes, L. panamá, L. djasiman, L. javanica, L. shermani y una serovariedad de Leptospira bi exa no patógena L. patoc. De las 449 muestras positivas a anticuerpos leptospirales se encontró que las variedades de leptospira que se encuentran en mayor porcentaje en las muestras analizadas son L. bataviae swart (24,6 %) L. javanica (21,3 %), L. sejroe (15,9 %), L. canicola (7,9 %), L. icterohemorragiae (7,7 %). 

Titulación obtenida de las muestras a diferentes serovariedades de Leptospira interrogans en la prueba de MAT. 

Se observó 321 muestras con títulos de 1/100 (71,5%), 403 títulos de 1/200 (89,8%), 134 títulos de 1/400 (29,8%) y una muestra de 1/800 (0,2%), ( Figura 6). 

Se determinó que cada muestra presenta anticuerpos para un promedio de 1,9 serovariedades diferentes. El análisis de serovares y su titulación expresa que L. tarasovi, L. saxkoebing, L. panamá, L. shermani, que se encuentran únicamente en una o dos muestras con títulos solo 1/100, mientras que L. canicola se mani esta en 56 muestras. 

La variedad L. javanica se mani esta con título de 1/200 en 114 muestras y L. bataviae swart con título 1/400 en 82 muestras, cuadro 1. 

 

Se realizó la prueba pareada con nuevas muestras obtenidas del 8,78% de reactores positivos (39 muestras) que mostraron en la primera prueba títulos de 1/100 y se observó incrementos en los títulos de dos veces en el 54% de los casos (21 muestras); cuatro veces en el 28% (11 muestras) y un 18 % no mostraron incremento de los títulos en la prueba pareada (7 muestras). 

Anticuerpos de leptospirosis en humanos 

De 89 muestras de suero humano recolectados de 10 predios diagnosticados con presencia de anticuerpos leptospirales en bovinos y sometidos a la MAT se determinó que el 16,85% de personas muestreadas presentan anticuerpos leptospirales ( Figura 8), de estos 13 hombres y 2 mujeres, las personas seropositivas tienen una edad promedio de 38 años. 

Los anticuerpos leptospirales que se encuentran en las muestras corresponden a las variedades L. bataviae swart, L. gripotyhosa, L sejroe, L. icterohemorragiae, L. castellonis, L. javanica, L. patoc, estas muestras tienen un promedio de 3,4 variedades diferentes de anticuerpos leptospirales cada una, L bataviae swart se encontró en el 35,5%. 

Las parroquias en la que se encuentran el mayor porcentaje de casos humanos positivos a anticuerpos leptospirale 

es el la parroquia San Sebastián con un 40% (6 casos) y las parroquias Yangana y Jimbilla con el 13,3% (2 casos) cada una. 

Al realizarse la comparación de los títulos de anticuerpos leptospirales en humanos, de la primera prueba con la segunda prueba de todas las 

muestras positivas se determinó que los títulos de anticuerpos de las muestras mantuvieron la titulación de la primera prueba en un 46,7%, el 46,7 % incremento los títulos en dos veces y el 6,7 % incremento en cuatro veces. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Continuará... 

Modificado por última vez enMartes, 28 Noviembre 2017 07:59
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