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Evaluación de perfiles séricos de dos presentaciones comerciales de enrofloxacina en bovinos Destacado

Evaluación de perfiles séricos de dos presentaciones comerciales de enrofloxacina en bovinos

El objetivo del presente estudio fue evaluar los parámetros farmacocinéticos y farmacodinámicos (PK/PD) de un prototipo de enrofloxacina (prototipo A) con el fin de determinar si es un producto bioequivalente. Se utilizaron 16 bovinos clínicamente sanos; con pesos aproximados de 200 kg tipo F1 (Cebú/Holstein); se dividieron aleatoriamente en 2 grupos de 8 animales cada uno.

El grupo 1 recibió el tratamiento “T1” el cual consistió en la aplicación del producto original de enrofloxacina al 10% a dosis de 7.5 mg/kg IM (máximo 15 mL/sitio de aplicación). El grupo 2 recibió el tratamiento “T2” del prototipo A al 10% a dosis de 7.5 mg/kg IM (máximo 15 mL/sitio de aplicación). Posterior a la aplicación se obtuvieron muestras de sangre en diferentes tiempos, la determinación del fármaco se realizó según la metodología descrita por Bennet et al; utilizando como microorganismo particularmente sensible una cepa ATCC 25922 de Escherichia coli. El análisis farmacocinético y estadístico se realizó considerando la metodología estadística descrita por Rani y Pargal; con modelos de farmacocinética compartamental del programa PKAnalyst® de Micromath. Los valores farmacocinéticos de Cmax, Tmax, AUC, AUMC, T1⁄2b, se analizarón mediante la prueba de ANOVA y Kruskal-Wallis. Los valores obtenidos para el prototipo “A” fueron una Cmax 2.9 ± 0.4 µg/mL, Tmax 4.1 ± 0.06 h, AUC 85.6 ± 1.0 µg/mL/h y T1⁄2 b 0.036 ± 0.004 h.; para el producto original: Cmax 2.2 ± 0.13 µg/mL, Tmax 2.08 ± 0.05 h, AUC 13.6 ± 0.7 µg/mL/h y T1⁄2b 0.027 ± 0.002. Dichos resultados muestran diferencias significativas entre ambos productos (P ≥ 0.05), evidenciando que el Prototipo “A” es superior al Producto Original.

Se concluye que el prototipo A no es bioequivalente al Producto Original, ya que es superior en las variables de Cmax y AUC, logrando cubrir los requisitos PK/PD para la enrofloxacina, lo cual lo convierte en un producto original. El mercado de los antibacterianos es uno de los más importantes para los laboratorios farmacéuticos de línea veterinaria; generando un gran número de presentaciones comerciales de un mismo fármaco. Debido a la gran demanda de dichos antibióticos y la competencia por precios, en muchos países se lleva a cabo la sustitución de medicamentos originales (de referencia) por medicamentos genéricos (símiles o intercambiables).

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BIOEQUIVALENCIAS
En las últimas décadas el uso de medicamentos genéricos ha ido en aumento, al existir una mayor disponibilidad de medicamentos, el médico veterinario debe seleccionar el producto que le pueda brindar una mayor efectividad terapéutica a un menor costo, para mantener la rentabilidad de la producción. *Durante mucho tiempo se consideró que dos productos genéricos de diferente marca, al administrarse en la misma cantidad de principio activo, deberían ser igualmente eficaces en la práctica clínica, sin embargo, no siempre sucede así, como han demostrado los recientes avances de la farmacocinética y estudios de bioequivalencias. En la comunidad veterinaria mundial se han implementado normas para garantizar la calidad de los productos farmacéuticos disponibles para el médico veterinario, obligando a los fabricantes de productos genéricos a demostrar que son intercambiables o bioequivalentes, con respecto al producto de referencia u original.

Se puede establecer intercambiabilidad mediante varios métodos, idealmente se debe elegir el más exacto, sensible y reproducible. La intercambiabilidad entre dos productos se puede basar en criterios farmacocinéticos, farmacodinámicos y clínicos. Entre los criterios farmacocinéticos aceptados científicamente, el más común se conoce con el nombre de bioequivalencia. En orden decreciente de exactitud, sensibilidad y reproducibilidad los métodos para establecer intercambiabilidad o bioequivalencia son: Estudios farmacocinéticos. Estudios de biodisponibilidad y perfiles farmacocinéticos, para establecer bioequivalencias. Estudios clínicos. También denominada como equivalencia terapéutica; la cual corresponde a la ausencia de una diferencia clínicamente significativa, mediante evaluaciones de desafíos en campo. Estas evaluaciones establecen únicamente intercambiabilidad. Estudios in vitro: Aplica a fármacos de alta solubilidad en agua o a dosis menores de un mismo preparado, tanto para los vehículos como para el principio activo (PA) que ya sea intercambiable, siempre y cuando el perfil farmacocinético del fármaco sea lineal, que la diferencia entre dosis sea debida a diferencias en la cantidad de PA y que la composición de las formulaciones sea cualitativamente idéntica (PA y vehículos). Establecen únicamente intercambiabilidad. Los conceptos de bioequivalencia e intercambiabilidad son considerados como sinónimos, sin embargo, un producto bioequivalente sí es intercambiable, pero un producto intercambiable no forzosamente es bioequivalente. Dos productos son bioequivalentes cuando la biodisponibilidad es igual; esto es, que la velocidad y el grado o magnitud en el que el principio activo o el ingrediente terapéutico es absorbido y se encuentra disponible en la sangre o sitio de acción en una matriz biológica, a partir de la misma vía de administración, con la misma presentación farmacéutica y a la misma dosis, asegurando así que la eficacia y seguridad de ambos sea esencialmente la misma. La intercambiabilidad demuestra únicamente igualdad química. Una intercambiabilidad se define como: producto farmacéutico que contienen el o los mismos principios activos en similar forma farmacéutica para la misma vía de administración y cumplen con los requisitos establecidos en la farmacopea de identidad, potencia, pureza, uniformidad del contenido, velocidad de disolución, etc., aunque los ingredientes inactivos, vehículos o excipientes, puedan diferir entre sí.

Existen principios activos a los cuales no es necesario realizarles evaluaciones de intercambiabilidad, y se les denomina como bioexenciones; esto es, que sean preparados de disolución rápida por vía oral y que contengan principios activos que se solubilicen en menos de 1 hora y se absorban por lo menos el 85% en no más de 2 horas en monogástricos y hasta 4 en rumiantes. Dos productos que han demostrado ser intercambiables o bioequivalentes suponen un igual desempeño clínico. El hecho de que algunos medicamentos no son iguales al medicamento original, no los hace necesariamente inferiores clínicamente siempre, a menudo sólo los hace distintos y deberán ajustarse para dar lugar a nuevas indicaciones o incluso para ponderar sus diferencias. Los estudios de bioequivalencia son útiles cuando: 1. Es necesario solicitar la autorización de comercialización de fármacos genéricos. 2. Cuando un laboratorio innovador cambia la formulación, la vía de administración, la forma farmacéutica o cuando se introducen cambios en el proceso de manufacturado que podrían afectar la biodisponibilidad del fármaco. Al realizar estudios de bioequivalencias se busca que la biodisponibilidad de él o los productos evaluados no difieran ± 20% con respecto al de referencia, esta tolerancia es aceptada debido a que no presenta consecuencias clínicas relevantes en un tratamiento. El sobrepasar estos límites en mayor o menor grado genera diferencias clínicamente relevantes en la intensidad del efecto terapéutico o en efectos colaterales. Los principales parámetros de biodisponibilidad evaluados para definir la existencia o falta de bioequivalencias son: * Concentración máxima (Cmax) * Área bajo la curva (AUC) * Relación Cmax/AUC * Vida media de eliminación (T1/2 b) * Tiempo máximo (Tmax) Las pruebas de bioequivalencia tiene ventajas significativas para el uso racional de fármacos en medicina veterinaria, entre ellas se pueden mencionar: * Promover la calidad en el proceso de manufacturado para poder garantizar la salud animal. * Promover la salud pública al contribuir a la prevención de residuos nocivos de fármacos en los productos alimenticios de origen animal. * Facilitar el uso racional de los antimicrobianos de alto impacto en salud pública y animal.

ENROFLOXACINA
La enrofloxacina es un derivado fluorinado del núcleo quinolin-ácido carboxílico desarrollado para uso exclusivo veterinario, es considerado como uno de los antibacterianos más potentes utilizado a la fecha en medicina veterinaria. Su mecanismo de acción es a partir de la inhibición de la subunidad A de la enzima topoisomerasa II (ADN girasa bacteriana), la cual es vital para la replicación de los ácidos nucleicos bacterianos ya que está implicada en el desenrollado, corte, y sellado del ADN. La inhibición de dicha enzima, conduce a una muerte celular en las bacterias. Por sus características farmacológicas, es de empleo frecuente para el tratamiento de una amplia variedad de patologías bacterianas de los animales domésticos. Su espectro de actividad es bueno contra bacterias Gram (–) como: Escherichia coli, Histophilus spp, Pasteurella spp con excepción de Pseudomonas aeruginosa, y presenta una potencia menor contra bacterias Gram (+), pero mantiene buena actividad terapéutica contra algunas cepas de Streptococcus spp, Staphylococcus spp y Erysipelothrix rhusiopathiae entre otras. Presenta una acción importante contra bacterias intracelulares como Mycoplasma spp, Chlamydia spp, Mycobacterium spp y Nocardia spp. El rango de dosificación varía de 5 - 7 mg/kg/día con presentaciones al 10%, pero recientemente se llegó a utilizar a dosis de 10 mg/kg/día, el ajuste de las dosis es debido a la eficacia clínica que ha presentado en campo al ser un fármaco concentración dependiente. La enrofloxacina se metaboliza a nivel hepático en ciprofloxacina, que es una quinolona de segunda generación de uso en medicina humana. Presenta una vida media larga (1-7 h aproximadamente) y amplio volumen de distribución, posterior a la administración SC o IM a dosis de 5-7 mg/kg se logran una Cmax de 0.8 a 3 µg/ml entre 1 a 4 horas. Se ha descrito como eficaz para las fluoroquinolonas una Cmax >10 a 12 veces la CMI o y se ha establecido una relación del AUC24h/CMI > 125 contra cepas de campo para predecir una buena eficacia terapéutica y cubrir la relación PK/PD (farmacocinética/farmacodinamica) requerida para este tipo de antibacterianos. En resumen, el uso indiscriminado y la existencia de presentaciones similares de dudosa calidad de enrofloxacina disponibles en el mercado, puede contribuir al surgimiento de resistencias bacterianas, como consecuencia a la reducción de su eficacia clínica y finalmente a terminar con uno de los antibacterianos de mayor y exclusiva utilidad en la medicina veterinaria.

MATERIAL Y MÉTODOS
El estudio se realizó en el Centro de Enseñanza, Investigación y Extensión en Ganadería Tropical (CEIEGT) de la Facultad de Medicina, Veterinaria y Zootecnia, UNAM; ubicado en el municipio de Tlapacoyán, del estado de Veracruz, México.

GRUPO DE ESTUDIO.
Se trabajó con 16 bovinos clínicamente sanos, machos y hembras; con pesos aproximados de 200 kg tipo F1 (Cebú/Holstein). Los parámetros de inclusión para la elección de los animales fueron: - No haber recibido ningún tipo de medicación por lo menos durante 3 semanas previas al estudio. - No presentar signología clínica de enfermedad (animales clínicamente sanos). - No presentar una variación en peso ± 20 Kg. Los animales fueron divididos aleatoriamente en 2 grupos de 8 animales cada uno. Cuadro Una vez elegidos los animales y separados en grupos, estos fueron alojados durante todo el tiempo de estudio en potreros, recibieron alimentación conforme al manejo normal del rancho (pastoreo, suplementación con sales minerales en saladeros y acceso a bebederos ad libitum).

TOMA DE MUESTRAS.
La obtención de muestras sanguíneas se obtuvo de la vena yugular por medio de un catéter largo heparinizado de calibre #18 en los siguientes tiempos: basal, 0.5 (30 minutos), 1, 2, 4, 10, 24, 48, 72, 96 y 120 horas. Fueron obtenidos de 3–5 mL de sangre por animal en cada tiempo de muestreo. Inmediatamente después de obtenidas las muestras, fueron centrifugadas a 3000 rpm/15 minutos, para posteriormente separar el suero. Cada muestra fue identificada de acuerdo al número de registro del animal, grupo de prueba y hora de muestreo; y posteriormente se mantuvieron en congelación a -20°C hasta el momento de su análisis.

MÉTODO ANALÍTICO.
Para la identificación de enrofloxacina en las muestras séricas, se utilizo la metodología microbiológica descrita por Bennet et al. Dicho método resulta altamente confiable (99%) comparado con el HPLC, según lo descrito por Küng et. al; como microorganismo particularmente sensible se utilizó una cepa ATCC 25922 de Escherichia coli. El método analítico de actividad/concentración establecido se basó en que la enrofloxacina y su principal metabolíto la ciprofloxacina poseen una actividad antibacteriana que sigue una linealidad de concentración. El método analítico elegido detecta sin diferenciar la presencia de enrofloxacina y sus metabolitos activos, dado lo cual la regresión lineal representa la suma de ellos.

FORTIFICACIONES.
Para establecer el grado de recuperación de enrofloxacina en el suero de bovino y el límite de detección y cuantificación se realizaron fortificaciones con 100 mL de plasma libre de fármaco. Inicialmente se corrieron 3 muestras de suero de los animales no tratados para asegurar que no tuvieran tratamiento alguno. Se utilizaron las siguientes diluciones de enrofloxacina en suero bovino de 0.039, 0.078125, 0.15625, 0.3125, 0.625, 1.25, 2.5, 5, 10 y 20 µg/mL.

ANÁLISIS DE MUESTRAS.
A partir de las diluciones de las muestras fortificadas, se realizó la curva de calibración del método microbiológico, la cual se obtuvo una vez que las diluciones fueron inoculadas en pozos realizados en una charola con un cultivo de la cepa ATCC de Escherichia coli, la cual fue incubada a 37°C por 24 horas. Posterior a la incubación, se midieron los halos de inhibición, y a continuación se obtuvieron los valores en milímetros y en µg/mL. Dichos valores fueron graficados para obtener la curva de recuperación; una vez obtenida dicha curva, se realizó la evaluación de las muestras biológicas, de las cuales se obtuvo en promedio 100 µL, los cuales fueron depositados en los pozos realizados en la charola que contenía la siembra de la cepa ATCC de Escherichia coli. Posterior a su incubación a 37°C, se obtuvo la medición de los halos, y con ayuda de la curva de regresión se pudieron obtener las concentraciones en µg/mL correspondientes a cada muestra. Se realizó considerando la metodología estadística descrita por Rani y Pargal; mediante modelos de farmacocinética compartamental con el programa PKAnalyst® de Micromath. Los siguientes datos farmacocinéticos se evaluaron mediante una prueba de ANOVA y Kruskal-Wallis: * Cmax= Concentración plasmática máxima. * Tmax= Tiempo para Cmax. * AUC= Área bajo la curva de concentración plasmática vs. tiempo. * AUMC= Área bajo la curva momento de concentración plasmática contra tiempo. * T1⁄2b= Vida media de eliminación. ΩC

Autor-es:*Juárez R.S.2, Sumano L.H.S.1, Gutiérrez O.L.1, Martínez C.I.2
Continuará…

Modificado por última vez enLunes, 22 Febrero 2016 19:26
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