Menu

loading...

Factores que influyen en la congelación del semen de toros (Segunda parte)

Factores que influyen en la congelación del semen de toros (Segunda parte)

Además de la probabilidad que un espermatozoide posee de fecundar un ovocito y de desarrollar el embrión normalmente, debe tenerse en cuenta el tipo de anomalía presente en el semen, la cual indica en qué grado está alterada la espermatogénesis de un toro. Por ejemplo, la presencia de «cabezas sueltas» o espermatozoides decapitados es considerada como una anomalía menos grave que la presencia de la gota proximal.

 

Podemos pensar que un espermatozoide decapitado tiene menos posibilidades de fecundar un ovocito que un espermatozoide que tiene gota proximal. Sin embargo es universalmente admitido que la presencia de gota proximal indica una alteración grave de la espermatogénesis. Por lo tanto debe dársele más importancia a la presencia de un 20% de gota proximal que a un 20% de espermatozoides decapitados en el eyaculado destinado a la congelación. Muchos estudios han investigado el mecanismo por el cual el semen de toro se daña cuando los espermatozoides llegan a 4oC o luego de la congelación. Si bien diferentes partes de los espermatozoides pueden verse afectadas, es la membrana que aparece como una de las principales causas de muerte celular. La rotura de la membrana plasmática está claramente asociada con la pérdida de viabilidad celular, pero una membrana plasmática intacta no siempre indica que la célula sea viable. Los daños que pueden producirse en éstas pueden ser modi caciones en su organización, permeabilidad y composición lipídica. Las membranas espermáticas que pueden verse afectadas por la criopreservación incluyen la membrana plasmática, la membrana externa del acrosoma y las membranas mitocondriales. 

En cualquier caso, la criopreservación, cuyo propósito es garantizar la supervivencia del semen, causa daños irreversibles en la membrana plasmática, lo que conlleva la muerte de un gran número de espermatozoides o, en los supervivientes, cambios similares a los observados durante la capacitación espermática, que provoca un acortamiento de su período de vida útil. 

La evaluación morfológica de la integridad de la membrana plasmática se realiza usando la óptica de contraste de fases, la óptica de contraste diferencial de interferencia o de Nomarski o las tinciones supravitales, como el verde rápido/eosina o la eosina/azul de anilina, el tripán azul/Giemsa o el amarillo de naftol/eritrosina. También ha sido valioso el examen a través de la microscopía electrónica o de barrido, para determinar aspectos de la integridad espermática. Actualmente, se están utilizando diversas tinciones uorescentes, las cuales presentan una mayor precisión en el estudio de las características de la membrana plasmática. Así, se ha estado usando ampliamente el diacetato de carboxi uoresceína y el ioduro de propidio, visualizándose con esta técnica los espermatozoides viables de color verde, frente a los muertos que se observan de color rojo anaranjado. La evaluación funcional de la misma puede llevarse a cabo mediante test de resistencia osmótica o Host. Esta prueba se basa en la capacidad del espermatozoide para captar agua en un medio hiposmótico y en que la hinchazón osmótica está asociada con el enrollamiento de la cola del espermatozoide, que se desenrolla cuando la célula es devuelta a un medio isosmótico. Para que esta respuesta se produzca, la membrana plasmática del espermatozoide debe estar íntegra y con los mecanismos de intercambio de uidos funcionando correctamente. La entrada de agua provoca en estas células un hinchamiento y enrollamiento del agelo. Las células con la membrana física o funcionalmente dañada no experimentan cambios en la forma del flagelo. Los valores obtenidos en esta prueba se correlacionan con otros parámetros de calidad seminal, como la motilidad, la viabilidad o la morfología. 

1.b Efecto toro 

La evidencia de la existencia de un efecto toro sobre la fertilidad de las vacas es corrientemente mencionada en la literatura 

(Everett y col., Humblot y col). Este efecto se mani esta precozmente después de la IA, y la clasi cación no varía enormemente cuando se estudian las TNR a 24 o a 90 días (Humblot). Existe una correlación de 0,90 entre la TNR 28 y 56 (Reurink y col.), y de 0,96 entre la TNR 56 y la TNR 60/90 días (VanDoormaal). 

La amplitud de esta variación entre toros es elevada cuando se consideran las IA destinadas a la prueba de progenie, ya que se observaron hasta 42 puntos porcentuales de diferencia en parición para una muestra de 913 toros Holstein utilizados con 300 a 700 IA. Los valores extremos son raros ya que para esta muestra de toros expresando la fertilidad de los mismos con respecto a su raza, 26 toros fueron estrictamente inferiores a –10, y 11 toros fueron estrictamente superiores a +6. La amplitud de estos resultados fue del orden de 3,9%, próxima a la observada por Everett y Bean., sobre una muestra de 4.500 toros. 

Sin embargo, cuando se consideran los toros de servicio, o sea aquellos testeados que representan el 85% de las IA realizadas, las uctuaciones son mucho más limitadas. En Francia, sobre 75 toros Holstein, Montbélaird y Normandos (+ de 20.000 IA cada uno entre los años 1996 y 1998), el porcentaje de parición expresado con respecto a un promedio varió de –8 a +4. De la misma manera, sobre los 20 toros más utilizados en Holanda, la TNR 56 varió de –5 a +2. Esta amplitud menor de la TNR, se explica por el refugo de los toros de testaje de baja fertilidad y por el número elevado de IA realizadas lo cual mejora la precisión. 

1.c Efecto eyaculado 

Frecuentemente se observa en los CIA que la calidad de un eyaculado no es constante y que en determinadas ocasiones los mismos presentan una motilidad inferior o un porcentaje de anomalías mayor. Es probable que la capacidad fecundante de tal eyaculado sea baja, lo que en realidad no se sabe ya que es eliminado por el CIA. Esta práctica contribuye a uniformar la calidad de los eyaculados de un toro e indirectamente reduce la variación entre toros. 

A los efectos de obtener semen de alta calidad a la descongelación, es necesario obtener semen puro de alta calidad lo cual esta in uenciado por: 

• La preparación sexual antes de la colecta 

• El trabajo con los toros en sala de monta 

• El ritmo de colecta • La alimentación 

• La ausencia de patología locomotoras o de pene y prepucio 

• La temperatura
• El toro en si............. 

• La diferencia entre el primer y el segundo: 

Existen, algunas diferencias entre el primer y segundo eyaculado colectado en un toro en una misma sesión de colecta. Según experiencia del autor el porcentaje de anomalías es siempre menor en los segundos eyaculados colectados, sin embargo el porcentaje de espermatozoides móviles al descongelado no di ere en forma significativa. Asimismo, Schenk., constato una composición diferente en el plasma seminal de los primeros y segundos eyaculados: 

Características seminales del primer y segundo eyaculado de toro colectado con 20 minutos de intervalo (Schenck) 

1.d Efecto edad 

El efecto edad del toro en relación al poder fecundante del semen se ha estudiado muy poco en razón de la falta de trazabilidad en lo que respecta a la fecha de producción del eyaculado y la IA. Sin embargo, este y col., en donde toros Holstein de 14 años presentaron una TNR 60/90 días inferior en 4% en relación a los toros de un año. En realidad la estimación del porcentaje de parición de los toros de progenie Holstein no di ere de aquella de los toros de servicio entre 60 a 107 meses (Taylor y col.), y la reducción de la fertilidad comienza a observarse a partir de los 5 años de edad. 

Un estudio realizado sobre las razas Holstein y Guernsey mostró que la regresión de la TNR en relación a la edad de los toros fue signi cativa para las dos razas a partir de 2 años (tabla 2) (p<0,01). Esta disminución fue de 0,31% de 2 a 16 años para los Holstein y de 0,50% para los Guersney de 2 a 13 años (Collins y col). 

1.e Efecto familia 

Una familia de toros se de ne como el conjunto de terneros machos nacidos del mismo padre. Si la fertilidad de los machos es «heredable», la fertilidad observada de los toros de testaje o progenie debiera lógicamente ser in uenciada por el padre. 

Así los resultados de pariciones obtenidos a partir de inseminaciones realizadas en Francia entre 1996 y 1998 permitieron observar la fertilidad de los toros de testaje nacidos de 13 familias de 3 razas: Holstein (n=9); Montbéliard (n=3) y Normando (n=1). Cada una de las familias estaba constituida por no menos de 40 toritos, los cuales realizaron 300 IA entre los años 96-98. Entre los fenómenos observados entre esas familias llamó la atención los resultados obtenidos en 3 de ellas que proporcionaron sistemáticamente una tasa de parición menor al promedio de las mismas y más variabilidad. 

1.f Efecto anomalías cromosómicas 

Uno de los estudios que debe realizarse cuando se obtiene una TNR baja en un número signi cativo de hembras en diferentes establecimientos con semen congelado de toros que no presentan problemas de calidad de semen (motilidad y morfología normal) es el cariotipo. La primera anomalía cromosómica en ganado bovino relacionada con la fertilidad fue descubierta en 1964: translocación 1/29. 

En el 2000 Ducos y col., estudiaron un caso de baja fertilidad a campo (<30%enmasde400IAP)en3toros de la raza Montbéliard. El análisis citogenético evidenció la presencia de una translocación cromosómica 12:17. 

2. Las medidas de manejo y medio ambiente 

2.1 Colecta de semen y sala de monta 

El trabajo en sala de monta realizado por el equipo de un CIA comprende una fase de preparación sexual o periodo de pre-excitación y una fase de excitación propiamente dicha compuesta de falsas monta sobre un súcubo o maniquí. 

Todo responsable de un CIA debe acompañar esta fase y monitorear la misma por lo menos una vez cada 15 días. No existe en opinión del autor ningún otro equipo de trabajo en un CIA que pueda in uenciar en forma tan significativa la cantidad y calidad de semen. La colecta de semen in uencia en forma importante la calidad de semen producida por intermedio de su personal, la calidad y limpieza de la sala de monta, el tipo y preparación de la vagina arti cial, y el ritmo o frecuencia de colecta. Optimizar la frecuencia de colecta a los efectos de reducir las reservas de semen en el epidídimo y aumentar el transito epididimario es una de los métodos más antiguos para mejorar la calidad de semen (Amman). 

En regla general los CIA de Europa y América del Norte usan un ritmo de colecta de 2 x 2 (2 eyaculados 2 veces por semana). Es interesante remarcar que en regla general los toros colectados con este ritmo presentan una calidad post descongelada superior en los segundos eyaculados colectados (Schenk). En regla general, es altamente recomendado de estimular sexualmente los toros antes de la colecta. Esta practica de manejo puede dividirse en dos fases: a) pre excitación sexual de 15-20 minutos en toros lecheros y 30 minutos en toros de carne de razas europeas colocando los animales en un brete contiguo a la sala de colecta y permitiendo a los animales observar a los otros toros saltando, y b) falsas montas, siendo una de las mejores técnicas para producir semen en cantidad y calidad en toros de razas europeas practicar dos falsas montas 5 minutos de espera restringida al lado del súcubo y una tercera falsa monta antes e colectar (Schenk J). 

Un trabajo interesante fue presentado por Yates J en 2002 comparando el comportamiento, libido y las características de semen antes y después de congelado de toros Holstein y Braham colectados en régimen diurno y nocturno. A pesar de una mejor respuesta a la colecta en régimen nocturno no se constato diferencia en la congelabilidad del semen. 

2.2 Efecto estación del año 

En los pequeños rumiantes es común observar un factor «estacional» sobre la calidad del semen y la fertilidad. La primavera constituye un período desfavorable para la gran mayoría de las razas ovinas, debido al aumento de la duración de los «horas luz», a la cual son sensibles carneros y machos cabríos (Colas y col., Corteel y col). 

En el bovino la variación estacional de la fertilidad es más discreta pero se conoce desde los años sesenta (Courot y col). La utilización de la técnica de congelación de semen en bovinos permitió distinguir la responsabilidad del macho y de la hembra en materia de estación del año, lo cual no era posible antiguamente cuando sólo se empleaba semen fresco. 

Así, los trabajos de Courot y col., en Francia mostraron que el semen de toros de raza Montbéliard producido en primavera fue más fecundo que aquel producido en otoño (2,4 puntos más de TNR 60/90 días). Por el contrario, Sullivan y Elliot., observaron una menor TNR 60/90 días (74,2%; P<0,01) obtenida con semen producido durante la primavera y verano, que aquella obtenida con semen producido en otoño e invierno (76,3%). 

Para Everett y Bean; igualmente el efecto «mes» de producción del semen in uyó en forma signi cativa sobre la fertilidad, haciendo variar el porcentaje de concepción en ±1,33%. En cambio, otros estudios no han puesto en evidencia un efecto claro del mes de producción sobre la TNR 30/60 y 60/90 días (Dimitripoulus); ni sobre el porcentaje de parición (Sullivan y col.). 

En América Latina destaca el trabajo presentado por investigadores Brasileros en la región Sureste de este país: Anchieta y col., comparando razas taurinas a cebuínas en dos grandes épocas del año: lluviosa y seca, ambas con temperaturas elevadas ( > 19 C). En regla general, la congelabilidad del semen, juzgada por apreciación subjetiva a la colecta, fue superior en las de razas taurinas que en las cebuínas, así como el descarte de eyaculados mayor en épocas lluviosas. 

2.3 Alimentación 

Pocos son los trabajos que han relacionado la alimentación de los toros de CIA con la producción y calidad del semen. 

El autor empleo durante varios años en CIA en Europa con toros estabulados dos estrategias de alimentación según que los reproductores se encontrasen en fase de producción de semen o en lay-off (reposo sexual). 

Toros en producción: 

• Heno de alfalfa o pradera a voluntad 

• Cama de paja 

• Ración concentrada (3-4 Kg/toro/ día en Holstein y 1-3 K en Normando) con 14.5% de proteínas, materia grasa 2,3%, 12,3% de celulosa bruta, 7,6% de cenizas. 

Toros en lay-off (16 meses a 3.5-4 años): 

• 15 K de ensilado de maíz 

• 7-8 K de heno 

• 400 g por día de un concentrado a base de soya y minerales para los toritos con menos de 24 meses y para aquellos con más de 24 meses solo minerales. 

Uno de los factores más conocidos en los CIA es el efecto negativo de las dietas altas en energía. En efecto, Coulter y col; pusieron en evidencia un efecto nefasto de dietas altamente energéticas (80% granos y 20% forraje) en toritos de carne destetados Angus y Hereford, a cual indujo una circunferencia escrotal importante pero un tono testicular reducido y una capacidad de termorregulación testicular menos e ciente. Asimismo, el examen de semen de los toritos así alimentados reveló un porcentaje mayor de anomalías espermáticas y un numero inferior de espermatozoides con motilidad progresiva frente a toros alimentados con dietas menos energéticas. 

La alimentación de los toros juega un papel fundamental en el desarrollo y la aparición de problemas en las pezuñas, las manifestaciones de úlceras y abscesos en la línea blanca constituyen muchos episodios de cojeras. Ambas enfermedades (salvo el absceso en la línea blanca producto de un traumatismo) son consecuencia de la incapacidad del corion para producir una pezuña de calidad y para ello la alimentación juega un papel decisivo. 

Cambios bruscos en la alimentación, baja calidad de los ensilados, poca bra en la ración conducirá a una menor salivación y por consiguiente a una reducción del efecto tampón que tiene la saliva en el rumen por lo que el riesgo de acidosis será mayor. 

A los efectos de prevenir los problemas de pezuñas en toros es necesario: 

• Mantener la estabulación de los toros limpia y seca, proporcionando en el brete una cama ya sea de arena o paja o agua, 

• Cuidar del piso de la sala de monta que debe ser antideslizante y con declive lateral, incluir un tapete de goma de 3 m x 2 m en la zona de colecta, 

• Todos los pisos donde los animales permanecen un cierto tiempo (incluido el de la sala de monta) deben ser tratados por acido acético 10 días antes que los toros ingresen (1 litro de vinagre diluido en 10 litros de agua, neutralizar el cemento a razón de 5 litros por cada 100 m2) 

• Realizar siempre una transición alimentaría gradual de por lo menos 10 días para permitir que la flora ruminal se adapte, 

• Realizar la toilette (recorte funcional) de las pezuñas 2 veces/año 

• Suplementar la ración de los toros con materias primas que intervienen en la salud de las pezuñas: Zinc, metionina, cisteina, Vitamina A y E, Biotina, Ca, P y relación Ca/P (muy importante en toros), Cobre, Selenio, Azufre. 

• Usar bicarbonato de sodio (200 g / día) en caso de alimentación en base a ensilaje. 

La suplementación de Zinc (forma orgánica por ej. propionato) en las raciones de toros ha sido revisada recientemente. El Zinc influencia la producción y secreción de testosterona, insulina y corticoides suprarenales en consecuencia procesos como la esperamatogenesis están en parte mediados por este mineral (Mc Dowell y col); Kumar y col; encontraron que algunos parámetros seminales de los toros suplementados con 35 ppm de Zinc orgánico (motilidad masal, número de espermatozoides por eyaculado y test de penetración de espermatozoides en mucus cervical) se mejoraban luego de un período de suplementación de 6 meses. 

3. Tecnología de tratamiento del semen 

3.1 Efecto Diluyente 

Desde el desarrollo de la criopreservación del semen (Polge), la yema de huevo, la albúmina bovina o humana, la leche, una base salina compuesta, y el glicerol fueron empleados en los diluyentes de semen bovino. En la especie bovina, la gran mayoría de los diluyentes a excepción de aquellos a base de leche, poseen 20 % de yema de huevo o un substituto del mismo en su composición. El rol de la yema de huevo durante la congelación es la de proteger los espermatozoides del efecto nefasto de la dilución así como del «cold shock» que ocurre durante el proceso de congelación- descongelación (Moussa y col). El mecanismo por el cual la yema de huevo protege a los espermatozoides es hasta hoy desconocida. 

En regla general la yema de huevo utilizada es la de gallina, sin embargo en los últimos años y en especies consideradas como «difíciles de congelar» (ex. Burros baudet du poitou) se ha empleado yema de huevo de codorniz que se caracteriza por ser mas rica que la yema de huevo de gallina en fosfatidilcolina, menos en fosfatilidiletalonamina y una relación baja de ácidos grasos saturados e insaturados (Trimeche y col). 

Los últimos avances en materia de diluyentes de semen bovino pueden clasi carse en: 

1. Aquellos que están relacionados a la protección de la membrana durante el proceso de congelación- descongelación. 

2. Aquellos que incorporan substancias a carácter antioxidante en el diluyente. 

Continuará... 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Autor/es: . Gustav Decuadro-Hansen.Virbac, France 

Modificado por última vez enLunes, 22 Mayo 2017 08:02
volver arriba